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he染色原理是什么,he染色方法什么叫he染色法呢

he染色原理是什么
he染色原理是易于被堿性或酸性染料著色的性質稱為嗜堿性和嗜酸性 。對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現象稱為中性 。組織內的蛋白質構成蛋白質的氨基酸的種類很多,它們有不同的等電點 。
在普通染色法中,染色液的酸堿度為pH6左右,細胞內的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經細胞內的粗面內質網及透明軟骨基質等均被堿性染料染色,這些物質稱為嗜堿性 。
細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質稱為嗜酸型 。如果改變染色液的酸堿度,pH值升高時,則原來被酸性染料染色的物質可變為嗜堿性;pH值降低時,原來被堿性染料染色的物質則可變為嗜酸性 。所以說染色液的pH值可以影響染色的反應 。
he染色方法什么叫he染色法呢1.蘇木精伊紅染色法,簡稱HE染色法,石蠟切片技術里常用的染色法之一 。
2.蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內的染色質和胞質內的核酸著紫藍色 。
3.伊紅為酸性染料 , 主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 。
4.HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學和科研中最基本、使用最廣泛的技術方法 。
5.原理:易于被堿性或酸性染料著色的性質稱為嗜堿性和嗜酸性 。
6.而對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現象稱為中性 。
he染色的實驗原理方法及注意事項是什么HE染色全名為蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)染色方法,是最基本的也是最重要的病理學染色技術 。
HE染色是目前國內外病理診斷上廣泛采用的 常規染色方法 。一張好的HE切片是保證正確病理診斷的關鍵 。切片質量的好壞,可直接影響疾病診斷的及時與準確性 。作為一個合格的實驗技術員,能制作出一張高質量的HE染色切片,是必須掌握的一門重要功課 。
HE染色的實驗原理及注意事項
一、細胞核染色原理:
蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著色 。細胞核內染色質的成分主要是DNA , 在DNA的雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色 。蘇木精在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色 。
二、細胞漿染色原理:
細胞漿內主要成分是蛋白質,為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關系 , 當pH調到蛋白質等電點4.7-5.0時,胞漿對外不顯電性,此時酸或堿性染料不易染色 。當pH調到6.7-6.8時 , 大于蛋白質的等電點pH值,表現酸性電離 , 而帶負電荷的陰離子,可被帶正電荷的染料染色,現時胞核也被染色,核和胞漿難以區分 。因此必須把pH調至胞漿等電點以下,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負電荷(陰離子)的染料染色 。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷(陽離子)結合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織,嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比 。
三、分化作用:
染色后 , 用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去,這個過程稱為分化作用,所用的溶液稱為分化液 。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木精的醌型結構,使組織與色素分離而褪色 。經蘇木精染色后,必須用0.5%鹽酸乙醇分化,使細胞核過多結合的蘇木精染料和細胞漿吸附的蘇木精染料脫去,在進行伊紅染色,才能保證細胞核與細胞漿染色的分明 。因此,在HE染色中分化是極為關鍵的一步 。
四、返藍作用:
分化之后,蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態,呈紅色,在堿性條件下處于藍色離子狀態 , 呈藍色 。組織切片經0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色,故分化之后,立即用水除去組織切片上的酸而終止分化 , 再用弱堿性水(0.2%氨水)使蘇木精染上的細胞核呈現藍色,這個過程稱為返藍作用或藍化作用 。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍 , 但所需時間較長 。
實驗材料
固定液:常用95%乙醇和冰丙酮
蘇木精染液:稱取蘇木精粉0.5g,銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中 , 然后取NaIO 31g,水5ml,再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,混合均勻,濾紙過濾,備用 。
伊紅染液:稱取0.5g水溶性伊紅染液,溶于100ml蒸餾水中 。
稀鹽酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%鹽酸 。
系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹膠 。
培養瓶、培養皿、眼科鑷、蓋玻片、載玻片、顯微鏡 。
實驗步驟
樣品制備:對于貼壁生長細胞,胰酶消化,調整細胞濃度約1×105/ml , 滴加于蓋玻片上(置于6孔板中) , 培養相應時間后,取出細胞爬片 , 用PBS 洗滌3次 。
樣品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗滌2次,每次1min 。
染核:蘇木素染液染色2-3min , 自來水洗滌 。
分色:鏡下觀察 , 若細胞核染色過深,用1%鹽酸酒精溶液分色數秒 , 自來水洗滌 。
染胞質:浸入伊紅染液染色1min,自來水洗滌 。
吹干或自然晾干細胞 爬片后,中性樹膠封片 。
若細胞用4%多聚甲醛固定,則染色時間相應延長,蘇木素染色12-15min,伊紅5min即可 。
實驗結果及注意事項
** 實驗結果**
細胞核呈藍色,細胞質,肌纖維 , 膠原纖維和紅細胞呈不同程度的紅色 。鈣鹽和細菌可呈藍色或紫藍色
注意事項:
1. 染色時調節pH值很重要 。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,組織酸化而影響細胞核著色 。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,這樣可以使細胞核著色較深 。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸 。
2. 切片染蘇木精后,分色這一步是關鍵,應在顯微鏡下控制進行 , 一般以細胞核染色清楚(晰)而細胞質基本無色為佳 。如果過分延長分色時間將導致染色太淺,應重新染色后再行分色 。
3. 切片經酒精脫水后,入二甲苯時可出現白色不透明狀態,此為脫水不徹底 , 應將切片退回無水酒精,更換酒精、二甲苯,以求徹底脫水與透明 。

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